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ELISA檢測試劑盒的操作程序總結
發布時間:2015-04-24   點擊次數:836次

    將它們分別進行一係列稀釋後,在不同的固相載體上按預定的ELISA檢測試劑盒操作步驟進行測定,然後比較測定結果。在哪一種載體上陽性結果與陰性結果判別zui大,這種載體就是這一試劑盒測定的zui合適的固相載體。

ELISA檢測試劑盒的準備和保存 
A. BDNF 標準品的稀釋和使用:在使用前 2 小時內準備。 
試劑盒提供 2 管標準品,每管 10ng,每次使用 1 管。 
1. 配製 10,000pg/ml 標準品:取 1ml 樣品稀釋液加入標準品管內,蓋好後靜置 10 分鍾以上,
然後反複顛倒/搓動以助溶解。 
2. 配製 2000pg/ml 標準品:取 0.2ml 10,000pg/ml 的標準品加入有 0.8ml 樣品稀釋液的
Eppendorf 管中,混勻,做上標記。 
3. 配製 1000pg/ml→31.2pg/ml 標準品:準備 6 隻 Eppendorf 管,每管加 0.3ml 樣品稀釋液,
分別標記上 1000pg/ml, 500pg/ml,250pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml,31.2pg/ml。取 0.3ml 
2000pg/ml 的標準品加入標記 1000pg/ml 的管中,混勻後同樣取出 0.3ml , 加入下一隻管中。
餘同此類推,直到zui後一隻樣品管。 
注意:已經稀釋的標準品(10,000pg/ml),應在 12 小時內使用。-20℃冷凍保存條件下,2 天
內可以使用,ELISA檢測試劑盒但不得反複凍融。 
B.生物素標記抗人 BDNF 抗體工作液的準備:在使用前 2 小時內準備。 
1. 根據每孔需要 0.1ml 計算總的用量(實際配製時應多配製 0.1-0.2ml)。 
2. 按 1μ ι 生物素標記抗人 BDNF 加抗體稀釋液 99μ ι 的比例配製工作液。輕輕混勻。 
C.親和素-過氧化物酶複合物(ABC)工作液的準備:在使用前 1 小時內準備。 
1. 根據每孔需要 0.1ml 計算總的用量(實配時應多配製 0.1-0.2ml)。 
2. 按 1μ ι 親和素-過氧化物酶複合物(ABC)加 ABC 稀釋液 99μ ι 的比例配製工作液。
輕輕混勻。 
ELISA檢測試劑盒操作程序 
已稀釋好的 ABC 和 TMB 顯色液在加入酶標板孔前都應預先在 37℃中平衡至少 30 分鍾。試
劑或樣品稀釋時,切不可忘記混勻。每次檢測都應該做標準曲線。用戶須估計樣品待測因子
的含量,決定適當的稀釋倍數。 

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