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ELISA檢測試劑盒的幾種方法
發布時間:2015-09-11   點擊次數:948次

研究經驗指出ELISA檢測試劑盒可以用來檢測血清樣本,看有還是沒有某個抗原或抗體,也可以看該抗原或抗體是多還是少,可以比較不同血清樣本之間該抗原/抗體的含量高低。

樣品收集:
1. 血清:全血樣品於室溫放置2小時或4℃過夜後於1000×g離心20分鍾,取上清即可檢測,收集血液的試管應為一次性的無熱原,無內毒素試管。
2. 血漿:抗凝劑推薦使用EDTA.Na2,樣品采集後30分鍾內於1000×g離心15分鍾,取上清即可檢測。避免使用溶血,高血脂樣品。
3. 細胞培養上清:取細胞培養上清於1000×g離心20分鍾,除去雜質及細胞碎片。取上清檢測。
4. 組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)衝洗組織,以去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重後將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣本對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,並做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑製劑)加入玻璃勻漿器中,於冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反複凍融。zui後將勻漿液於5000×g離心5~10分鍾,取上清檢測。
5. 其它生物樣品:1000×g離心20分鍾,取上清即可檢測.
6. 樣品應清澈透明,懸浮物應離心去除。
7. 樣品收集後若不及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存於-20℃/-80℃冰箱內,避免反複凍融,1-6月內檢測,4℃保存的應在1周內進行檢測。
8. 如果您的樣本中檢測物濃度高於標準品zui高值,請根據實際情況,做適當倍數稀釋(建議先做預實驗,以確定稀釋倍數)。

不同批次的ELISA檢測試劑盒在製作過程中很難保證質量完全一致,即使是通過批批檢的項目其檢測結果也存在差異,因此必須選擇和訂購長批號的試劑,並保證保存條件。嚴格執行這一標準可以避免因試劑批號改變而重新建立質控體係及重新評估試劑,並且能夠保證結果的穩定性;對於效期短、使用率低的試劑,應當小量分裝,每次使用則取分裝部分即可,避免反複凍融造成試劑的失效。

ELISA測定模式包括以下幾種:雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑製法,其中競爭抑製法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時差所引起的不公平競爭等因素的影響,結果重複性較差,質量較難控製。

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