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時值盛夏,再次迎來了ELISA科研高峰期
發布時間:2018-08-06   點擊次數:1228次

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在ELISA實驗中,洗滌是關鍵步驟之一。而有一些參數會影響洗滌步驟的效果,這些參數包括吸液高度和吸入位置,這兩者都能調整,以降低背景(殘留量)和差異。下麵葵花宝典视频视频禁止18就一起來看看今天的重點內容,上海葵花宝典视频分区舞蹈专区生物與您初夏談說ELISA抽吸的操作技巧。
殘留液體中包含未結合的抗原或抗體,它們會增加背景信號。殘留量越小,殘留液體越少,轉移到下一步的幹擾液體也就越少。吸液高度會明顯影響殘留量;如果洗滌吸頭與反應孔底部的距離稍大,那就會讓殘留量急劇增加。反之,如果洗滌吸頭壓著反應孔底部,那麽也會使吸液效率降低,殘留量增加。

 目前的洗板機一般使用兩種類型的洗頭:剛性和浮動的。浮動洗頭中的吸頭可在洗滌過程中自由上下移動,而剛性洗頭則固定在適當的位置。使用剛性洗頭的洗滌操作在優化起來更為複雜,因為你需要非常仔細地調整吸液高度。如果你們實驗室使用幾種不同的板,那可能會很耗時。在使用浮動洗頭時,吸頭會降到反應孔的底部。調整高度就不是很重要,因此洗頭會下降到底部。
    抽吸的位置也對殘留量有著重要影響;如果每個孔隻使用一個抽吸點(這很常見,因為更快),那麽抽吸的位置需要優化。zui佳的位置取決於洗頭的性狀,但它幾乎不在反應孔的中間,即使這是所有洗頭zui常見的默認位置。一般來說,zui佳位置在孔中間與孔壁之間的某處。
    反應孔的形狀也會影響殘留量。C形底(平底圓角)的微孔板一般會比那些平底尖角的微孔板殘留量更低。
   

ELISA試劑盒如果沒有自動洗板機,采用手工洗滌,那麽也需要注意幾點。使用8道或12道微量移液器,采用倒吸的方法進行洗滌;不同廠家的洗液不宜相互混用。洗板時需保證微孔板平放,將洗滌液注滿各孔,但盡量避免漏液,以每孔300 μl為宜;板洗次數一般為3次,要保證洗板的浸泡時間,每次浸泡時間一般為30-60 秒;盡量減少洗液殘留量,推薦每次洗板後進行拍板,並及時更換吸水紙,避免吸水紙的碎屑粘到反應孔內。
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