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影響ELISA試劑盒測定結果有的原因
發布時間:2018-08-16   點擊次數:1207次

很多時候客戶在訂購ELISA試劑盒時會問到一些問題,影響ELISA試劑盒測定結果有哪些原因呢?讓我司錢與您一起來討論:
 

ELISA試劑盒方法被廣泛應用於各種抗原和抗體測定,具有靈敏度高,操作簡單等優點,但是在具體實驗過程中影響因素較多,並且要按照嚴格的說明要求,在臨床檢驗中除正常反應外,有時常可見到一些錯誤結果(即假陽性或假陰性結果)。
    影響ELISA測定錯誤結果的原因主要有:①標本因素;②試劑因素;③操作因素。本文就標本因素對ELISA測定的影響做如下討論。
(1)類風濕因子
人血清中IgM、IgG型類風濕因子(RF)可以與ELISA係統中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結合,從而導致假陽性。ELISA試劑盒解決該情況的辦法是:①用F(ab)2替代完整的IgG;②標本用聯有熱變性(63℃,10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效);③檢測抗原時,可以用2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中,使RF降解。
(2)補體
ELISA係統中固相一抗和標記二抗過程中,抗體分子發生變構,其FC段的補體C1q分子結合位點被暴露出來,使C1q 可以將二者連接起來,從而造成假陽性。解決的辦法是:①用EDTA稀釋標本;②用53℃,10 min或56℃,30 min加熱血清使C1q滅活。
(3)嗜異性抗體
人類血清中含有能與齧齒類動物(如鼠等)Ig (s) 結合的天然嗜異性抗體,可將ELISA係統中一抗和二抗連接起來,也能造成假陽性。解決的辦法是:可在標本稀釋液中加入過量的動物Ig (s) ,但加入量不足或亞類不同時無效。
(4)嗜靶抗原的自身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,有時能與靶抗原結合形成複合物,在ELISA方法中均可幹擾抗原抗體測定結果。為避免以上情況出現,解決的辦法是:測定前需用理化方法將其解離後再測定。
(5)醫源性誘導的抗鼠Ig (s) 抗體
臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療,用放射性同位素標記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術,均有可能使這些病人體內產生抗鼠抗體;另外,被鼠等齧齒類動物咬傷的病人體內也可以產生抗鼠Ig (s) 抗體。這些病人ELISA測定時均可產生假陽性。解決的辦法是:測定抗原時,在標本中加入足量的正常鼠Ig (s) ,從而克服由於上述原因造成的假陽性。
(6)交叉反應物質
類AFP樣物質等,是與靶抗原有交叉反應的物質。在用多抗測定抗原時對測定結果影響不大,但在用單克隆抗體測定抗原時,如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應的靶決定簇時,也會出現假陽性結果。
(7)標本中其它成分的影響 血清脂質過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等,ELISA檢測試劑盒均對ELISA測定結果有幹擾作用。

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