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ATCC細胞有幾種不同的保存辦法
發布時間:2020-12-08   點擊次數:94次

1、傳代保存法
有些微生物當遇到冷凍或單調等處理時,因此在這種情況下,隻能求助於傳代培養保存法。傳代培養便是要守時地進行ATCC細胞轉接、培養後再保存,它是基本的微生物保存法,例如酸奶等常用生產菌種的保存。傳代保存時,培養基的濃度不宜過高,營養成分不宜過於豐盛,尤其是碳水化合物的濃度應在或許的範圍內盡量下降。培養溫度通常以稍低於適生長溫度為好。若為產酸ATCC細胞,則應在培養基中增加少數碳酸鈣。一般地,大多數菌種的保藏溫度以5℃為好,像厭氧菌、霍亂弧菌及部分病原真菌等微生物菌種則可以運用37℃進行保存,而蕈類等大型食用菌的ATCC細胞則可以室溫直接保存。

傳代培養保存法盡管簡練,但其缺陷也很明顯,如:
ATCC細胞管棉塞常常簡略發黴;
②菌株的遺傳性狀簡略產生變異;
③重複傳代時,菌株的病原性、構成生理活性物質的才幹以及構成孢子的才幹等均有下降;
④需求守時轉種,作業量大;
⑤雜菌的汙染機會較多。

2、液體白臘覆蓋保存法
該法較前一種方法保存ATCC細胞的時間更長,適用於黴菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。此法可防止單調,並經過限製氧的供給而到達削弱微生物代謝作用的目的。其具有方法簡練的優點,一起也適用於不宜冷凍單調的微生物(如產孢才幹低的絲狀菌)的保存,而某些細菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、紅螺菌及沙門氏菌等和一些真菌如卷黴菌、小克銀漢黴、毛黴、根黴等不宜選用此法進行ATCC細胞保藏。

3、懸液保存法
即便微生物混懸於恰當溶液中進行保存的方法。常用的有:
① 蒸餾水保存法:適用於黴菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮於蒸餾水中即可在室溫下保存數年。本法應留心防止水分的蒸發。
② 糖液保存法:適用於酵母菌,如將其菌體懸浮於10%的蔗糖溶液中,然後於冷暗處保存,可長達10年。除此之外,也可運用緩衝液或食鹽水等進行保存。

在進行冷凍單調時,需留心以下幾個問題:
1.冷凍單調前的培養條件:首要查驗ATCC細胞純度。一般地說,將待保存的微生物在營養豐盛且簡略增菌的培養基上進行培養為宜;菌齡以到達對數生長期為好;若為有芽孢或孢子的微生物,則以芽孢和孢子構成今後進行保存為好;菌液濃度以高為好,如細菌應到達109~1010/ml。可在安瓶外側符號或在安瓶內封入標簽。
2.安瓶的預備:將安瓶在2%HCl中浸泡過夜,自來水衝刷3次後,蒸餾水刷淨,單調,塞棉塞,貼標簽,幹熱滅菌或溫熱滅菌後,60℃恒溫單調。
3.ATCC細胞增加保護劑:常用的保護劑有脫脂乳、12%蔗糖、加7.5%葡萄糖的一般肉湯以及加7.5%葡萄糖的血清等等。

4、冷凍單調保存法
它的原理是首要將微生物冷凍,然後在減壓下使用進步現象除去水分。從菌體中除去大部分水分後,細胞的生理活動就會中止,因此可以到達長期保持生命狀況的目的。該方法適用於絕大多數微生物ATCC細胞(包括噬菌體和立克次氏體等)的保存。

 在保藏過程中,必須使微生物的代謝處於不活潑或相對停止的狀況,才能在一定的時間內使其不發生變異而又保持生活能力。

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