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孔雀石綠檢測試劑盒

更新時間:2016-11-06

簡要描述:

孔雀石綠檢測試劑盒的服務和業務在同行獲得*好評,其立足於生命科學領域,全力打造高品質生物科技產品鏈和技術服務鏈,也具備豐富的管理經驗,同時葵花宝典视频视频禁止18建立了集、售後服務等多方位的服務體係,有激情、有理想,更有責任感,是您科研道路上值得信賴的夥伴。

孔雀石綠檢測試劑盒使用說明書(酶聯免疫法)

孔雀石綠檢測試劑盒原理及用途
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,同時把隱性孔雀石綠氧化成孔雀石綠,可檢測動物組織和水樣中的孔雀石綠(Malachite Green,MG)總量。試劑盒由預包被偶聯抗原的酶標板、辣根酶標記物、抗體、標準品及其他配套試劑組成。檢測時,加入標準品或樣品溶液,樣本中的孔雀石綠和酶標板上預包被偶聯抗原競爭抗孔雀石綠抗體,加入酶標記物後,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含孔雀石綠含量成負相關,與標準曲線比較即可得出樣本中孔雀石綠的殘留量。
2 技術指標
2.1 試劑盒靈敏度:0.05ppb(ng/ml)
2.2 反應模式:37℃,10min~30min~30min~15min
2.3 檢測下限:
魚/蝦等水產品 ……………0.5ppb
水樣 …………………………0.1ppb
2.4 交叉反應率:
顯性孔雀石綠………………………100%
結晶紫………………………………91%
隱性孔雀石綠(氧化後)…………100%
隱性結晶紫(氧化後)……………91%
 2.5 樣本回收率:
魚/蝦等水產品、水樣……………90%±10%
3 試劑盒組成
酶標板………………………………96孔
10×標準品(棕色蓋):各0.5ml
0ppb、0.5ppb、1ppb、2ppb、4ppb、8ppb
標準品稀釋液(藍蓋)………………10ml
10×濃縮酶結合物…………………1.6ml
10×濃縮抗體……………………0.8ml
底物液A(白蓋)………………………7ml
底物液B(黑蓋)………………………7ml
終止液(黃蓋)………………………7ml
10X濃縮洗滌液(白蓋)……………50ml
樣本稀釋緩衝液(紅蓋)………………5ml
氧化劑(黑蓋)…………………………3ml
說明書 ………………………………1份
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器:酶標儀、打印機、均質器 、氮氣吹幹裝置、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)、恒溫箱
4.2 微量移液器:單道20µl-200µl、100µl-1000µl、多道300µl
4.3 試劑:乙腈、乙酸、二氯甲烷、無水硫酸鈉、中性氧化鋁、正己烷
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知:
實驗器具必須潔淨並使用一次性吸頭,以避免汙染幹擾實驗結果。
5.2 配液:
配液1:樣本提取液
    首先將乙腈與二氯甲烷配成體積比為2:1混合液,然後向上述混合液中加入乙酸,使其終濃度約為1%,按需配製。(例:100ml 乙腈+50ml 二氯甲烷+1.5ml 乙酸。)
5.3 樣本前處理步驟:
5.3.1 低脂肪含量樣品(羅非魚、鯽魚、鰱魚、鱅魚、草魚、蝦、鯉魚等)
1)魚蝦去皮取肉,用勻漿器均質樣品;
2)稱取2g均質好的樣品,放入50ml離心管中,加入10ml樣本提取液(配液1),立即搖勻,加入1g無水硫酸鈉,充分震蕩10min,4000r/min 離心5 min;
3)取7ml上清移至50ml離心管中,加入20ul氧化劑,震蕩2min,加入7ml 正己烷,顛倒混勻1min,4000r/min離心5min。
4)取下層5ml,50-60℃下氮氣吹幹。加入300ul 乙腈,渦旋使殘渣溶解(注意蓋緊蓋防止乙腈揮發掉)。
5)測定時取上述乙腈溶解液25ul,加50ul樣本稀釋緩衝液,175μl 蒸餾水,混合均勻,取50ul分析。
    樣本稀釋倍數:3     檢測下限:0.5ppb
5.3.2 高脂肪含量樣品(鰻魚、鯰魚等)
1)魚蝦去皮取肉,用勻漿器均質樣品;
2)稱取2g均質好的樣品,放入50ml離心管中,加入10ml樣本提取液(配液1),立即搖勻,再加入1g中性氧化鋁、1g無水硫酸鈉,充分震蕩5min,4000r/min 離心5 min;
3)取7ml上清移至50ml離心管中,加入20ul氧化劑,震蕩2min,加入7ml 正己烷,顛倒混勻1min,4000r/min離心5 min。
4)棄去全部上層正己烷層(注:中間蛋白脂肪層需棄除),再加入7ml 正己烷,顛倒混勻1min,4000r/min 離心5min; 
5)取下層5ml,50-60℃下氮氣吹幹,加入300ul 乙腈,渦旋使殘渣溶解(注意蓋緊蓋防止乙腈揮發掉)。
6)測定時取上述乙腈溶解液25ul,加50ul樣本稀釋緩衝液,175ul 蒸餾水,混合均勻,加入500ul正己烷渦旋2min,棄去全部上層正己烷,取下層50ul分析。
    樣本稀釋倍數:3     檢測下限:0.5ppb
5.3.2水質樣品
取水樣175ul, 加入50ul 樣本稀釋緩衝液, 25ul 乙腈,取50ul分析。 
樣本稀釋倍數:1.43    檢測下限:0.1ppb
注:此方法所得到的結果為孔雀石綠;隱性孔雀石綠;結晶紫;隱性結晶紫的總量。
酶聯免疫試驗步驟
    將所需試劑從4℃冷藏環境中取出,置於室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結晶需恢複到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存於2-8℃。
實驗開始前需:
配液A:洗滌工作液
將50ml 10×濃縮洗滌液用去離子水按1:9稀釋成500ml工作洗滌液備用。
配液B:活化劑工作液
將氧化劑按1:99體積進行稀釋(現用現配,按需配製)
配液C:抗體工作液
用配液A(洗滌工作液)將10×濃縮抗體10倍稀釋(臨時用時,按需配製)
配液D:酶標記物
用配液A(洗滌工作液)將10×濃縮酶結合物10倍稀釋(臨時用時,按需配製)
製備孔雀石綠標準液:
標準品溶液(0ppb,0.05ppb,0.1ppb,0.2ppb,0.4ppb,0.8ppb)
取6個1.5ml離心管,把標準品濃縮液用標準品稀釋液稀釋10倍(如:450ul標準品稀釋液加入50ul 10×標準品濃縮液)
6.1 編    號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,並記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
6.2 活化:加120ul活化劑工作液(配液B)到微孔中,室溫下反應10min,倒掉拍幹,加洗滌工作液(配液A)250ul/孔,洗滌5次,每次間隔30s,棄去孔中液體,在吸水紙上拍幹(拍幹後未被清除的氣泡可用未使用過的吸頭戳破)。
6.3 加樣反應:加標準品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然後加抗體工作液50µl/孔,輕輕振蕩5秒混勻,37℃避光反應30分鍾。
6.4 洗    滌:將孔內液體甩幹,用洗滌液工作液250µl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,zui後用吸水紙拍幹。
6.5 加酶反應:加酶標記物100µl/孔,37℃避光反應30分鍾。
6.6洗    滌:同上
6.7 顯    色:加底物液A 50µl/孔,再加底物液B 50µl/孔,輕輕振蕩5秒混勻,37℃避光顯色15分鍾。
6.8 終    止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應。
6.9 測吸光值:用酶標儀於450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應在終止反應後10分鍾內完成。
7 結果分析
7.1 百分吸光率的計算
    標準液或樣本的百分吸光率等於標準液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以*個標準液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即
 百分吸光度值(%)=A×100%A0
A—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標準溶液的平均吸光度值
7.2 標準曲線的繪製與計算
    以標準液百分吸光率為縱坐標,對應的標準液濃度(ppb)的對數為橫坐標,繪製標準液的半對數曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中,從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度,乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中待測物的實際濃度。
    若利用試劑盒專業分析軟件進行計算,更便於大量樣本的準確、快速分析。(索取)
8 注意事項
8.1 室溫低於25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會導致所有標準的OD值偏低。
8.2 在洗板過程中如果出現板孔幹燥的情況,則會出現標準曲線不成線性,重複性不好的現象。所以洗板拍幹後應立即進行下一步操作。
8.3 混合要均勻,洗板要徹底,在ELISA分析中的再現性,很大程度上取決於洗板的*性。
8.4 在所有孵育過程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。
8.5 不要使用過了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質,應當棄之。0標準的吸光度值小於0.5個單位(A450nm< 0.5 )時,表示試劑可能變質。
8.7 反應終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。
貯藏及保存期
儲藏條件:試劑盒於2-8℃保存,避免冷凍。
保 質 期:該產品有效期為1年,生產日期見包裝盒。

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